3° Seminario Institucional 2020

Se realizará el tercer seminario institucional del año 2020, el mismo será el miércoles 07 de octubre a las 10:00am, en modalidad virtual en Google meet.

SALA VIRTUAL: https://meet.google.com/ygb-dcxs-jnp

A continuación el título y resumen de las charla:

"Implementación y optimización de algoritmos diagnósticos para COVID19"

María Jimena Manzur y Maximiliano Juri Ayub

Area Biología Molecular

FQByF

IMIBIO-SL (Profesional de apoyo)

Luego de que la OMS declarara oficialmente el estado de pandemia debido a la rápida diseminación de la infección causada por el SARS-Cov-2, los principales esfuerzos para combatirla se focalizaron en la rápida detección del virus y el aislamiento de los posibles transmisores de la infección. Para dicho objetivo, la RT-qPCR es la técnica de referencia para el diagnóstico molecular. Entre otros centros de referencia, el CDC (Centers for Disease Control and Prevention) de Estados Unidos, estableció un protocolo que  consiste en dos reacciones de RT-qPCR que identifican por un lado material genético específico del genoma viral (Gen N) y por otro, el gen RNAsa P humano como control positivo de la extracción de RNA y de la eficiencia de la transcripción inversa. Esto último imprescindible para evitar falsos negativos.

Dicho protocolo, altamente validado y robusto, presenta dos aspectos que pueden ser mejorados. En el marco de una colaboración entre la UNSL y el Ministerio de Salud Provincial, adaptamos el proceso aplicando la metodología de PCR dúplex, empleando sondas marcadas con fluoróforos diferentes para la detección de los genes viral y humano, aumentando de esta forma el rendimiento de la técnica y permitiendo la detección de ambas dianas en un mismo tubo de reacción. Por otro lado, el análisis de los primers validados por CDC para la detección de RNAsa P, nos mostró que dicha reacción no permite distinguir entre ADN genómico (ADNg) y ADN copia (ADNc), con lo cual se hace imposible garantizar la integridad y calidad de la muestra analizada. Por lo tanto diseñamos nuevos primers que nos permiten la detección únicamente de ARN retrotranscripto, lo cual es una reacción más adecuada para la detección de virus con genoma de ARN como el SARS-Cov2.

En resumen, adaptamos la reacción de detección de SARS-Cov2 sin modificar la esencia de la misma, disminuyendo en un 50% los insumos utilizados y fundamentalmente el tiempo y complejidad del proceso, y proponemos una sencilla adaptación de la detección del gen RNasa P haciendo más exigente la validación de la muestra. Ambas modificaciones contribuyen a disminuir aún más la posibilidad de resultados falsos negativos.